| Английский оригинал | Перевод на русский | |||
|---|---|---|---|---|
Сожалеем, но текст оригинала доступен только зарегистрированным пользователям. | После изучения данной главы вы сможете: Donatello 12.02.23 в 16:39 | |||
— Называть все части светового микроскопа и области его применения; Donatello 12.02.23 в 16:40 | ||||
— Описывать другие типы микроскопов, а именно цифровой и электронный микроскопы; Donatello 12.02.23 в 16:40 | ||||
— Выделять особенности строения ткани при световой микроскопии: Donatello 12.02.23 в 16:41 | ||||
• Клетка Donatello 12.02.23 в 16:41 | ||||
◦ Ядро Donatello 12.02.23 в 16:41 | ||||
◦ Цитозоль (цитоплазма) Donatello 12.02.23 в 16:41 | ||||
• Внеклеточный матрикс Donatello 12.02.23 в 16:41 | ||||
— Давать краткое описание этапам подготовки образцов к визуализа- Donatello 12.02.23 в 16:42 | ||||
Распознавать наиболее распространенные методы гистологического окрашивания, в том числе его основной принцип, цветовую гамму, какие компоненты клетки подходят для окрашивания, как разные красители дают представление о строении и функционировании клеток и тканей: Donatello 12.02.23 в 16:43 | ||||
◦ Окрашивание гематоксилином и эозином Donatello 12.02.23 в 16:43 | ||||
◦ Окрашивание реактивом Шиффа (PAS) Donatello 12.02.23 в 16:43 | ||||
• Иллюстрировать примерами, как обработка ткани влияет на ее внешний вид и что данные особенности говорят о структуре и функционировании клеток или тканей конкретного среза Donatello 12.02.23 в 16:43 | ||||
— Подбирать наиболее подходящие методы гистологического анализа (тип микроскопа и краситель) для исследования. Donatello 12.02.23 в 16:44 | ||||
1.1 Микроскопия Mikelangelo 12.02.23 в 8:17 | ||||
1.1.1 Световой микроскоп Mikelangelo 12.02.23 в 8:18 | ||||
Визуализация мелких образцов, которые не видны невооруженным глазом, осуществляется с помощью микроскопа. И хотя цифровая микроскопия постепенно вытесняет традиционную в качестве наиболее предпочтительного метода гистологических исследований, но понимание того, как работает оптического микроскоп все еще остается полезным навыком при анализе и образцов с предметного стекла, и их оцифрованных изображений. Ниже приведено краткое описание классического микроскопа, которое может незначительно отличаться от его других модификаций. Donatello 12.02.23 в 16:49 | ||||
Световой микроскоп предназначен для увеличения изображения ткани, размещенной на предметном стекле (Рис. 1.1). Свет от источника освещения (лампы) фокусируется посредством конденсора, проходит изначально сквозь образец на предметном столике, а затем — сквозь систему линз (объективов и окуляра), увеличивая изображение среза. Donatello 12.02.23 в 16:50 | ||||
На Рис.1.1 головка (синий квадрат) развернута в противоположную от пользователя сторону для удобства хранения. Ослабив фиксирующий винт в основании головки можно ее повернуть. Наилучший подход к изучению изображения под микроскопом — поворот головки на 180°. И обратно, когда микроскоп не используется. Donatello 12.02.23 в 16:50 | ||||
Предметное стекло с образцом фиксируется на столике специальными держателями или зажимами. Механизм передвижения столика по осям X-Y может смещать его в направлении вперед-назад или вправо-влево, что позволяет изучить образец под разными углами. Donatello 12.02.23 в 16:50 | ||||
Источником света выступает лампочка в основании микроскопа. Donatello 12.02.23 в 16:51 | ||||
Для настройки яркости освещения имеется кнопка включения- выключения подсветки и регулятор яркости. Donatello 12.02.23 в 16:51 | ||||
Конденсор фокусирует исходящий от лампы свет прежде, чем он достигнет образца. С помощью специального регулятора высоту конденсора можно менять. При работе с большинством предметных стекол конденсор должен находится ниже их на 1 мм. Donatello 12.02.23 в 16:51 | ||||
После того, как свет пройдет через образец на предметном стекле, его изображение увеличивается с помощью двух объективов. Как правило, на револьверной головке микроскопа есть 3-4 нижних объектива (турелей), которые можно чередовать для получения желаемого размера изображения. Верхний объектив называется окуляром (см. ниже). Увеличенное изображение получается путем комбинирования верхнего и нижних объективов. Для удобства использования, а также во избежание повреждения объективов и стекол, всегда следует начинать работу с объектива с наименьшим увеличением (кратностью 4х). Взяв образец в фокус, можно постепенно переключаться на большее увеличение (кратностью 10х, 40х и 100х). Donatello 12.02.23 в 16:51 | ||||
Рис. 1.1 Типичный световой микроскоп Mikelangelo 12.02.23 в 8:23 | ||||
Фокусировка образца происходит с помощью регуляторов, поднимающих и опускающих столик. Регулятор грубой фокусировки перемещает столик быстрее, и его следует использовать только при низком увеличении. Взяв изображение в фокус, нужно переключиться на объектив с большим увеличением и использовать регулятор точной фокусировки. Donatello 12.02.23 в 16:52 | ||||
И, наконец, окуляры — как правило, 10-кратные — также увеличи- вают изображение. При исследовании образца следует использовать оба глаза во избежание возникновения многочисленных головных болей. Одной из важных особенностей окуляров является возможность на- стройки межзрачкового расстояния, которое на микроскопе регулируется под расположение глаз того, кто им пользуется. Donatello 12.02.23 в 16:54 | ||||
Помните, что для этого у одних микроскопов имеется отдельный регулятор межзрачкового расстояния, у других — можно двигать сами окуляры. Donatello 12.02.23 в 16:54 | ||||
Еще одна важная настройка отвечает за то, чтобы оба глаза видели изображение в фокусе. Один из окуляров обычно снабжен регулятором диоптрий, который меняет для него фокальную плоскость. Для этого закройте глаз, который смотрит в окуляр, требующий настройки (на Рис. 1.1 это левый глаз), и корректируйте изображение во втором окуляре («с фиксированным фокусом») с помощью регуляторов грубой и тонкой фокусировки до тех пор, пока оно не станет четким. Затем закройте другой глаз и настраивайте фокусировку на первом окуляре с помощью регулятора диоптрий, пока изображение также не приобретет четкие черты. Donatello 12.02.23 в 16:54 | ||||
1.1.2 Цифровая микроскопия Mikelangelo 12.02.23 в 8:28 | ||||
Оптические микроскопы веками применялись для изучения образцов на предметных стеклах и до сих пор используются многими практикующими врачами и учеными. Однако цифровая микроскопия становится все более востребованной и уже является стандартом, который во многих школах применяется для гистологических исследований. Donatello 12.02.23 в 17:01 | ||||
Для создания цифровых слайдов изображений предметные стекла с образцами сканируются в слайд-сканере. Полученные данные могут храниться в нескольких форматах, но просматривать оцифрованные изображения можно с помощью любого компьютера (Рис. 1.2). Управление очень интуитивно и понятно. Так, чтобы переместить слайд, его достаточно перетащить мышью. Если у нее есть колесико прокрутки, его можно использовать (иногда в сочетании с клавишей Ctrl) для измене- ния размера изображения. Или же использовать меню (обведено кружком на Рис. 1.2). В правом верхнем углу показано отсканированное изображение слайда. Прямоугольником выделена та область, которая в данный момент видна на экране, и ее размер меняется в зависимости от степени увеличения. Каждая система для оцифровки слайдов имеет свои отличия. Их функциональность варьируется в зависимости от операционной системы, типа мыши и других настроек компьютера. Исследование — лучший метод познания. Donatello 12.02.23 в 17:01 | ||||
Рис. 1.2 Цифровой слайд. Mikelangelo 12.02.23 в 8:32 | ||||
1.1.3 Традиционная микроскопия в сравнении с цифровой Mikelangelo 12.02.23 в 8:33 | ||||
В классическом оптическом микроскопе изображение увеличивается путем умножения кратности линз объективов и окуляров. Степень увеличения объектива можно выбирать самому, а вот окуляры, как правило, имеют 10-кратное увеличение. Если в револьверной головке стоит 40-кратный объектив, то максимально изображение увечится в 400 раз (40 х 10). Donatello 12.02.23 в 17:02 | ||||
При создании цифровых слайдов используются только объективы, аналогичные тем, что установлены в оптическом микроскопе. В зависимости от системы цифровой слайд может иметь панель масштаба, которая определяет величину изображение. Чтобы ее изменить, достаточно навести курсор мыши на панель и отредактировать масштаб с помощью колеса прокрутки. Как правило, таким способом можно максимально увеличить изображение в 20 или 40 раз. Тут можно подумать, что масштабирование цифровых слайдов сильно уступает оптическим микроскопами. Но не стоит забывать, что в последнем изображение проецируется через крошечные окуляры, в то время как цифровые слайды отображаются на больших компьютерных мониторах с высоким разрешением. Donatello 12.02.23 в 17:02 | ||||
1.1.4 Другие виды микроскопии Mikelangelo 12.02.23 в 8:35 | ||||
Существуют и другие виды микроскопов для визуализации клеток и тканей (например, фазово-контрастный, конфокальный), которые выходят за рамки данной публикации. Но об одном из них —просвечивающем электронном микроскопе —все же стоит упомянуть. Основные принципы работы схожи со световой микроскопией за исключением того факта, что вместо света через образец проходит пучок электронов. Изображение имеет большее увеличение и разрешение, чем под оптическим микроскопом. Анализ электронных микрофотографий будет рассмотрен в следующей главе. Donatello 12.02.23 в 17:03 | ||||
1.2 Основные характеристики клеток и тканей Mikelangelo 12.02.23 в 8:36 | ||||
Прежде чем приступать к углубленному изучению гистологии, стоит начать со схемы одиночной клетки (Рис. 1.3). Хотя в этой книге подробно не затрагиваются темы цитологии (на молекулярном уровне), общая структура и функции компонентов клетки будут описаны в последующих главах. На данный момент следует знать, что: Donatello 12.02.23 в 17:03 | ||||
— Внешняя клеточная мембрана — плазматическая мембрана — Donatello 12.02.23 в 17:03 | ||||
— Клетка содержит множество органелл, наиболее значимой из них является ядро. Donatello 12.02.23 в 17:03 | ||||
— Все содержимое клетки, помимо ядра, называется Donatello 12.02.23 в 17:04 | ||||
цитоплазмой (или цитозолем, хотя эти два понятия не совсем тождественные. Donatello 12.02.23 в 17:05 | ||||
Микровосинки Mikelangelo 12.02.23 в 16:01 | ||||
Типичная клетка Mikelangelo 12.02.23 в 16:02 | ||||
Реснички Donatello 12.02.23 в 17:56 | ||||
Пероксисома Donatello 12.02.23 в 17:57 | ||||
Cекреторные везикулы Donatello 12.02.23 в 17:59 | ||||
Цитоплазматическая мебрана Mikelangelo 12.02.23 в 16:03 | ||||
| Непереведённых символов: 0 | ||||