| # | Оригинал (английский) | Перевод (русский) | ||
|---|---|---|---|---|
| 109 | ||||
| 110 | ||||
| 111 | ||||
| 112 | 0Гематоксилин — синий краситель, который локализуется в отрицательно заряженных клеточных структурах (например, дезоксирибонуклеиновой кислоте [ДНК], рибонуклеиновой кислоте [РНК]). Структуры, которые окрашиваются гематоксилином, называются базофильными. (Donatello)
| |||
| 113 | 0Эозин — красно-розовый краситель, который локализуется в положительно заряженных клеточных структурах (например, в белках и митохондриях). Структуры, которые окрашиваются эозином, как правило, называют эозинофильными или ацидофильными (иногда).
(Donatello) | |||
| 114 | 0Рис. 1.12 Окрашенная гематоксилином и эозином ткань печени. Видны ядра клеток печени (синие стрелки) и соединительная ткань (пунктир). (Donatello)
| |||
| 115 | 0Рис. 1.13 Поджелудочная железа, окрашенная гематоксилином и эозином . Видны ацинус (черный пунктир), отдельная клетка (желтый пунктир) и цитоплазматическая базофилия (желтые стрелки). (Donatello)
| |||
| 116 | 0Рис. 1.14 Воспаленная ткань, окрашенная гематоксилином и эозином. Видны клетки с цитоплазматической базофилией (синие стрелки) и без нее (зеленые стрелки). На снимке также виден кровеносный сосуд (пунктир) с эритроцитами (черная стрелка). (Donatello)
| |||
| 117 | 0На Рис. 1.14 еще одно изображение клеток с цитоплазматической базофилией (синие стрелки). Сравните их с клетками с эозинофильной цитоплазмой (зеленые стрелки). (Donatello)
| |||
| 118 | ||||
| 119 | 0Клетки с большим содержанием цитоплазматических белков демонстрируют повышенный уровень эозинофилов. На Рис. 1.15а изображены клетки с большим содержанием митохондрий (черный пунктир), а на Рис. 1.15б — срез скелетных мышц.
(Donatello) | |||
| 120 | 0Как реакция цитоплазмы на окрашивание дает нам ключ к пониманию функционирования клетки, так и реакция ядра на окрашивание указывает на ту или иную клеточную активность. Генетический материал, он же ДНК, может находиться в ядре, в кон- денсированном неактивном (гетерохроматин) или в декон- денсированном активном (эухроматин) состоянии. Наличие конденсированной ДНК в клетке приводит к тому, что ядра меньшего размера имеют наиболее насыщенную окраску (черные стрелки, Рис.1.16). Активная клетка, наоборот, демонстрирует крупное и бледной ядро (желтые стрелки). (Donatello)
| |||
| 121 | ||||
| 122 | 0Рис. 1.15 (а) Паращитовидная железа, окрашенная гематоксилином и эозином. Видны клетки с повышенной цитоплазматической эозинофилией (контуром). (б) Скелетные мышцы, окрашенные гематоксилином и эозином. (Donatello)
| |||
| 123 | 0Рис. 1.16 Печень. Видны ядра активных (желтые стрелки) и неактивных (черные стрелки) клеток. (Donatello)
| |||
| 124 | ||||
| 125 | 0Окрашивание реактивом Шиффа (PAS) — метод окрашивания для выделения углеводов. Структуры, реагирующие на реактив, приобре- тают ярко-пурпурный (фиолетовый) окрас и называются PAS-положи- тельными (PAS+). В противовес, срез ткани обычно обрабатывается основным красителем, чтобы лучше выделить ядро. К структурам PAS+ внутри клетки относятся аппарат Гольджи, плазматическая мембрана и наполненные слизью везикулы бокаловидных клеток. Данные органел- лы будут подробно рассмотрены в последующих главах. (Donatello)
| |||
| 126 | 0На Рис. 1.17 изображена ткань, окрашенная PAS. Липидный бислой плазматических мембран содержит углеводный компонент гликокалик- сом. Благодаря ему границы клеток ткани после окрашивания имеют более четкие черты. Клетки, которые положительно реагируют на интенсивное окрашивание реактивом (черные стрелки), содержат в своей цитоплазме множество секреторных везикул, наполненных гликопротеинами. Многие другие структуры в клетках и внеклеточном матриксе также являются PAS+. Более подробная информация о них будет представлена в следующих главах. (Donatello)
| |||
| 127 | ||||
| 128 | 0Это последняя тема, затрагивающая процесс подготовки материала для исследования. Артефакты — это особенности подготовленного среза, которые отсутствовали в исходном образце, но возникли в результате его подготовки.
(Donatello) | |||
| 129 | 0Рис. 1.17 Тощая кишка, окрашенная PAS. Видны богатые углеводами бокаловидные клетки (черные стрелки). (Donatello)
| |||
| 130 | 0Отсутствие окрашивания в цитоплазме свидетельствует о наличии специфических молекул в ткани. Некоторые компоненты клетки плохо впитывают те или иные красители. Например, клетки печени (гепато- циты) содержат гликоген, который плохо поддается стандартным кра- сителям гематоксилину и эозину. На Рис. 1.18 показано, как изменение уровня гликогена в гепатоцитах приводит к местами неравномерному окрашиванию цитоплазмы. До некоторой степени все клетки демонстрируют слабое цитоплазматическое окрашивание. Но отдельно можно выделить клетки с множеством абсолютно чистых участков, а следовательно, с большим количеством гликогена (выделено пунктиром). (Donatello)
| |||
| 131 | 0Некоторые клеточные компоненты также могут вымываться из образца во время фиксации ткани. На месте остается чистая область, которая и является ключом к тому, что когда-то существовало в исходной ткани. В коре надпочечников липоидные тельца хранятся в цитоплазме клеток в качестве предшественников стероидных гормонов, вырабатываемых клетками. Эти тельца смываются при стандартной подготовке срезов. На Рис. 1.19 степень окрашивания цитоплазмы варьируется в зависимости от области. Клетки с наиболее «размытой» цитоплазмой расположены в центре снимка.
(Donatello) | |||
| 132 | 0Рис. 1.18 Печень. Видны клетки со слабой степенью окрашивания (пунктир) вследствие большого присутствия гликогена. (Donatello)
| |||
| 133 | 0Рис. 1.19 Надпочечник. Видны области слабого окрашивания (в центре) вследствие большого присутствия липоидных телец. (Donatello)
| |||
| 134 | 0Рис. 1.20 Гиалиновый хрящ. Видны клетки (черные стрелки), пустые лакуны (синие стрелки) и внеклеточный матрикс. (Donatello)
| |||
| 135 | 0матрикс имеет полужидкую структуру, поэтому он сжимается меньше, чем содержащиеся в нем клетки (черные стрелки). Из-за этого образуются полости (лакуны), в которых располагаются сморщенные клетки. При резке они часто выпадают из своих лакун. (Donatello)
| |||
| 136 | 0Еще одним артефактом процесса подготовки образцов является усадка ткани. Это происходит в большинстве случаев, хотя некоторые виды фиксации могут заметно минимизировать степень усадки. Не все ткани в срезах сжимаются одинаково. Когда соседние тканевые структуры сжимаются с разной степенью, они начинают отслаиваться друг от друга, образуя пустоту внутри среза. К примеру, на Рис. 1.20 дано изображение хрящевой ткани, у которой внеклеточный (Donatello)
| |||
| 137 | 0Рис. 1.21 показаны два примера артефактов, которые не столь полезны. На Рис. 1.21а изображено поперечное сечение эластичной артерии. Во время усадки ткани сосуд как бы складывается внутрь самого себя, образуя темные загибы (зеленые стрелки), которые не являются реальными клеточными структурами, а лишь участками ткани, наложенными друг на друга. На Рис. 1.21б снимок разорванной ткани (черная стрелка) с какой-то инородной частицей (синяя стрелка). (Donatello)
| |||
| 138 | ||||
| 139 | 0Гистология — это наука об изучении биологических структур столь маленьких, что их невозможно увидеть невооруженным глазом. Для их изучения используются микроскопы, которые увеличивают изображе- ния структур. Существует альтернативный способ, когда ткани скани- руются и сохраняются в электронном формате (цифровые слайды). Для визуализации ткань (Donatello)
| |||
| 140 | 0должна пройти несколько этапов подготовки: фиксация, заливка, резка и окрашивание. Для выделения (Donatello)
| |||
| 141 | 0конкретных структур используют разнообразные красители. Самые распространенные их них — гематоксилин и эозин. Ядра клеток окрашенных ими срезов имеют синий цвет, а цитоплазма и внеклеточный матрикс, как правило, розовый. (Donatello)
| |||
| 142 | 0Также цитоплазма клеток, синтезирующих большое количество белка, изобилует рибосомами, а значит при окрашивании гематоксилином и эозином будет демонстрировать цитоплазматическую базофилию. Другим распространенным гистологическим красителем является реактив Шиффа (PAS), способный выделять углеводы. Артефакты — это особенности среза ткани, появляющиеся во время его подготовки. Это могут быть неокрашенные области, следы вымывания компонентов или усадка ткани. Артефакты могут быть полезны при определении функции клетки или при идентификации типов тканей. (Donatello)
| |||
| 145 | 0Рис. 1.21 (а) Аорта. Видны складки ткани (зеленые стрелки).
(б) Пищевод. Виден разрыв тканей (черная стрелка) и инородное тело (синяя стрелка). (Donatello) |