| Английский оригинал | Перевод на русский | |||
|---|---|---|---|---|
Сожалеем, но текст оригинала доступен только зарегистрированным пользователям. | — Гематоксилином и эозином Donatello 12.02.23 в 20:01 | |||
— Реактивом Шиффа (PAS) Donatello 12.02.23 в 20:01 | ||||
Гематоксилин и эозин Donatello 12.02.23 в 20:02 | ||||
Гематоксилин — синий краситель, который локализуется в отрицательно заряженных клеточных структурах (например, дезоксирибонуклеиновой кислоте [ДНК], рибонуклеиновой кислоте [РНК]). Структуры, которые окрашиваются гематоксилином, называются базофильными. Donatello 12.02.23 в 20:03 | ||||
Эозин — красно-розовый краситель, который локализуется в положительно заряженных клеточных структурах (например, в белках и митохондриях). Структуры, которые окрашиваются эозином, как правило, называют эозинофильными или ацидофильными (иногда). Donatello 12.02.23 в 20:03 | ||||
Рис. 1.12 Окрашенная гематоксилином и эозином ткань печени. Видны ядра клеток печени (синие стрелки) и соединительная ткань (пунктир). Donatello 12.02.23 в 20:04 | ||||
Рис. 1.13 Поджелудочная железа, окрашенная гематоксилином и эозином . Видны ацинус (черный пунктир), отдельная клетка (желтый пунктир) и цитоплазматическая базофилия (желтые стрелки). Donatello 12.02.23 в 20:04 | ||||
Рис. 1.14 Воспаленная ткань, окрашенная гематоксилином и эозином. Видны клетки с цитоплазматической базофилией (синие стрелки) и без нее (зеленые стрелки). На снимке также виден кровеносный сосуд (пунктир) с эритроцитами (черная стрелка). Donatello 12.02.23 в 20:06 | ||||
На Рис. 1.14 еще одно изображение клеток с цитоплазматической базофилией (синие стрелки). Сравните их с клетками с эозинофильной цитоплазмой (зеленые стрелки). Donatello 12.02.23 в 20:06 | ||||
а Donatello 12.02.23 в 20:06 | ||||
Клетки с большим содержанием цитоплазматических белков демонстрируют повышенный уровень эозинофилов. На Рис. 1.15а изображены клетки с большим содержанием митохондрий (черный пунктир), а на Рис. 1.15б — срез скелетных мышц. Donatello 12.02.23 в 20:07 | ||||
Как реакция цитоплазмы на окрашивание дает нам ключ к пониманию функционирования клетки, так и реакция ядра на окрашивание указывает на ту или иную клеточную активность. Генетический материал, он же ДНК, может находиться в ядре, в кон- денсированном неактивном (гетерохроматин) или в декон- денсированном активном (эухроматин) состоянии. Наличие конденсированной ДНК в клетке приводит к тому, что ядра меньшего размера имеют наиболее насыщенную окраску (черные стрелки, Рис.1.16). Активная клетка, наоборот, демонстрирует крупное и бледной ядро (желтые стрелки). Donatello 12.02.23 в 20:07 | ||||
б Donatello 12.02.23 в 20:07 | ||||
Рис. 1.15 (а) Паращитовидная железа, окрашенная гематоксилином и эозином. Видны клетки с повышенной цитоплазматической эозинофилией (контуром). (б) Скелетные мышцы, окрашенные гематоксилином и эозином. Donatello 12.02.23 в 20:08 | ||||
Рис. 1.16 Печень. Видны ядра активных (желтые стрелки) и неактивных (черные стрелки) клеток. Donatello 12.02.23 в 20:08 | ||||
Окрашивание реактивом Шиффа (PAS) Donatello 12.02.23 в 20:08 | ||||
Окрашивание реактивом Шиффа (PAS) — метод окрашивания для выделения углеводов. Структуры, реагирующие на реактив, приобре- тают ярко-пурпурный (фиолетовый) окрас и называются PAS-положи- тельными (PAS+). В противовес, срез ткани обычно обрабатывается основным красителем, чтобы лучше выделить ядро. К структурам PAS+ внутри клетки относятся аппарат Гольджи, плазматическая мембрана и наполненные слизью везикулы бокаловидных клеток. Данные органел- лы будут подробно рассмотрены в последующих главах. Donatello 12.02.23 в 20:09 | ||||
На Рис. 1.17 изображена ткань, окрашенная PAS. Липидный бислой плазматических мембран содержит углеводный компонент гликокалик- сом. Благодаря ему границы клеток ткани после окрашивания имеют более четкие черты. Клетки, которые положительно реагируют на интенсивное окрашивание реактивом (черные стрелки), содержат в своей цитоплазме множество секреторных везикул, наполненных гликопротеинами. Многие другие структуры в клетках и внеклеточном матриксе также являются PAS+. Более подробная информация о них будет представлена в следующих главах. Donatello 12.02.23 в 20:09 | ||||
1.3.5 Артефакты Donatello 12.02.23 в 20:09 | ||||
Это последняя тема, затрагивающая процесс подготовки материала для исследования. Артефакты — это особенности подготовленного среза, которые отсутствовали в исходном образце, но возникли в результате его подготовки. Donatello 12.02.23 в 20:09 | ||||
Рис. 1.17 Тощая кишка, окрашенная PAS. Видны богатые углеводами бокаловидные клетки (черные стрелки). Donatello 12.02.23 в 20:09 | ||||
Отсутствие окрашивания в цитоплазме свидетельствует о наличии специфических молекул в ткани. Некоторые компоненты клетки плохо впитывают те или иные красители. Например, клетки печени (гепато- циты) содержат гликоген, который плохо поддается стандартным кра- сителям гематоксилину и эозину. На Рис. 1.18 показано, как изменение уровня гликогена в гепатоцитах приводит к местами неравномерному окрашиванию цитоплазмы. До некоторой степени все клетки демонстрируют слабое цитоплазматическое окрашивание. Но отдельно можно выделить клетки с множеством абсолютно чистых участков, а следовательно, с большим количеством гликогена (выделено пунктиром). Donatello 12.02.23 в 20:10 | ||||
Некоторые клеточные компоненты также могут вымываться из образца во время фиксации ткани. На месте остается чистая область, которая и является ключом к тому, что когда-то существовало в исходной ткани. В коре надпочечников липоидные тельца хранятся в цитоплазме клеток в качестве предшественников стероидных гормонов, вырабатываемых клетками. Эти тельца смываются при стандартной подготовке срезов. На Рис. 1.19 степень окрашивания цитоплазмы варьируется в зависимости от области. Клетки с наиболее «размытой» цитоплазмой расположены в центре снимка. Donatello 12.02.23 в 20:10 | ||||
Рис. 1.18 Печень. Видны клетки со слабой степенью окрашивания (пунктир) вследствие большого присутствия гликогена. Donatello 12.02.23 в 20:10 | ||||
Рис. 1.19 Надпочечник. Видны области слабого окрашивания (в центре) вследствие большого присутствия липоидных телец. Donatello 12.02.23 в 20:10 | ||||
Рис. 1.20 Гиалиновый хрящ. Видны клетки (черные стрелки), пустые лакуны (синие стрелки) и внеклеточный матрикс. Donatello 12.02.23 в 20:10 | ||||
матрикс имеет полужидкую структуру, поэтому он сжимается меньше, чем содержащиеся в нем клетки (черные стрелки). Из-за этого образуются полости (лакуны), в которых располагаются сморщенные клетки. При резке они часто выпадают из своих лакун. Donatello 12.02.23 в 20:11 | ||||
Еще одним артефактом процесса подготовки образцов является усадка ткани. Это происходит в большинстве случаев, хотя некоторые виды фиксации могут заметно минимизировать степень усадки. Не все ткани в срезах сжимаются одинаково. Когда соседние тканевые структуры сжимаются с разной степенью, они начинают отслаиваться друг от друга, образуя пустоту внутри среза. К примеру, на Рис. 1.20 дано изображение хрящевой ткани, у которой внеклеточный Donatello 12.02.23 в 20:12 | ||||
Рис. 1.21 показаны два примера артефактов, которые не столь полезны. На Рис. 1.21а изображено поперечное сечение эластичной артерии. Во время усадки ткани сосуд как бы складывается внутрь самого себя, образуя темные загибы (зеленые стрелки), которые не являются реальными клеточными структурами, а лишь участками ткани, наложенными друг на друга. На Рис. 1.21б снимок разорванной ткани (черная стрелка) с какой-то инородной частицей (синяя стрелка). Donatello 12.02.23 в 20:12 | ||||
1.4 Заключение Donatello 12.02.23 в 20:12 | ||||
Гистология — это наука об изучении биологических структур столь маленьких, что их невозможно увидеть невооруженным глазом. Для их изучения используются микроскопы, которые увеличивают изображе- ния структур. Существует альтернативный способ, когда ткани скани- руются и сохраняются в электронном формате (цифровые слайды). Для визуализации ткань Donatello 12.02.23 в 20:12 | ||||
должна пройти несколько этапов подготовки: фиксация, заливка, резка и окрашивание. Для выделения Donatello 12.02.23 в 20:14 | ||||
конкретных структур используют разнообразные красители. Самые распространенные их них — гематоксилин и эозин. Ядра клеток окрашенных ими срезов имеют синий цвет, а цитоплазма и внеклеточный матрикс, как правило, розовый. Donatello 12.02.23 в 20:14 | ||||
Также цитоплазма клеток, синтезирующих большое количество белка, изобилует рибосомами, а значит при окрашивании гематоксилином и эозином будет демонстрировать цитоплазматическую базофилию. Другим распространенным гистологическим красителем является реактив Шиффа (PAS), способный выделять углеводы. Артефакты — это особенности среза ткани, появляющиеся во время его подготовки. Это могут быть неокрашенные области, следы вымывания компонентов или усадка ткани. Артефакты могут быть полезны при определении функции клетки или при идентификации типов тканей. Donatello 12.02.23 в 20:14 | ||||
Рис. 1.21 (а) Аорта. Видны складки ткани (зеленые стрелки). Donatello 12.02.23 в 20:15 | ||||
| Непереведённых символов: 0 | ||||